一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />   
  1.了解念珠菌顯色培養(yǎng)基的配方，并掌握其制備方法及操作技巧。
  
  2.掌握念珠菌培養(yǎng)基中添加顯色劑的原理及作用。
  
  3.利用培養(yǎng)基分離念珠菌并鑒定其形態(tài)特征。
  
  二、實(shí)驗(yàn)原理
  
  念珠菌顯色培養(yǎng)基是一種特殊的培養(yǎng)基，其主要成分包括腐胺、蔗糖、麥芽粉、小麥胚芽浸出液、酵母細(xì)胞壁等，再加入甲基藍(lán)等顯色劑。在念珠菌的生長(zhǎng)過(guò)程中，顯色劑甲基藍(lán)會(huì)沉積于菌落中心，使念珠菌菌落呈現(xiàn)出典型的藍(lán)色。
  
  念珠菌是一種真菌，屬于酵母菌門，是人和動(dòng)物體內(nèi)常見(jiàn)的條件致病菌。念珠菌在正常人群中也是常見(jiàn)的共生菌，但在免疫力低下或受損者中會(huì)引起多種疾病，如口腔、陰道感染等。因此，通過(guò)念珠菌顯色培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)，能夠及時(shí)篩查出感染念珠菌的患者，為診斷和治療提供幫助。
  
  三、實(shí)驗(yàn)步驟
  
  1.配制步驟
  
  （1）準(zhǔn)備器材：量筒、量杯、磁力攪拌器、pH計(jì)、自潔壓力蒸汽滅菌鍋等。
  
  （2）配制主要原料：蔗糖30g、腐胺1g、麥芽粉25g、小麥胚芽浸出液3g、酵母細(xì)胞壁1g、甲基藍(lán)0.5g、蒸餾水1000ml。
  
  （3）依照以上配方，將所有原料稱量并混合，加入蒸餾水中。
  
  （4）pH值調(diào)節(jié)至7.0左右，并在121℃下高壓蒸汽滅菌30分鐘。
  
  2.培養(yǎng)及鑒定
  
  （1）將已知念珠菌接種于顯色培養(yǎng)基平板上，平均涂布，標(biāo)記菌株及文化條件。
  
  （2）將接種的培養(yǎng)板倒置并放置于恒溫培養(yǎng)箱中，37℃下培養(yǎng)24-48小時(shí)。
  
  （3）觀察培養(yǎng)板上的菌落生長(zhǎng)情況，主要注意菌落的形態(tài)、顏色、質(zhì)地等特征，查看是否有形成典型的藍(lán)色菌落。
  
  （4）進(jìn)行念珠菌顯微鏡檢查，查看菌落的細(xì)胞形態(tài)及胞壁、胞膜等特征。
  
  四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
  
  1.配制
  
  念珠菌顯色培養(yǎng)基的配制利用了念珠菌在培養(yǎng)過(guò)程中分泌胃蛋白酶等蛋白酶分解腐胺的作用，同時(shí)添加的蔗糖、麥芽粉等成分則促進(jìn)念珠菌的生長(zhǎng)繁殖。小麥胚芽浸出液和酵母細(xì)胞壁含有多種微量元素和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為菌落的生長(zhǎng)發(fā)育提供豐富的營(yíng)養(yǎng)條件。甲基藍(lán)的加入則使念珠菌菌落呈現(xiàn)出藍(lán)色，方便快速篩查念珠菌菌株。
  
  2.培養(yǎng)結(jié)果與鑒定
  
  經(jīng)24-48小時(shí)的培養(yǎng)，觀察到念珠菌菌落呈現(xiàn)出典型的藍(lán)色，并有清晰的環(huán)形邊緣。菌落呈圓形或橢圓形，直徑一般在2-5mm之間，表面光滑或略呈粗糙狀，質(zhì)軟。顯微鏡下觀察到念珠菌細(xì)胞為酵母樣細(xì)胞，直徑一般為3-8μm，表面有胞壁，胞膜外具有特殊的多糖膠囊。
  
  念珠菌顯色培養(yǎng)基的配制和使用非常方便，菌落能夠迅速呈現(xiàn)出典型的藍(lán)色，避免了傳統(tǒng)的念珠菌培養(yǎng)需要通過(guò)菌落形態(tài)及特殊生長(zhǎng)條件等綜合考慮來(lái)作出鑒定的復(fù)雜步驟。同時(shí)，念珠菌在顯色培養(yǎng)基的培養(yǎng)也為快速篩查、定量測(cè)定念珠菌提供了便捷方法。